上海远慕生物科技有限公司

  上海远慕生物科技是家专业供应进口/国产ELISA试剂盒的优质供应商，专业出售人热休克蛋白糖蛋白96（HSP gp96）ELISA检测试剂盒，酶联免疫试剂盒，白介素试剂盒，金标检测试剂盒，染色试剂盒，生化试剂盒以及培养基，抗体，动物血清，标准品，化学试剂，实验耗材，细胞株，其他实验试剂及实验品，ELISA种属涵盖了科研实验所需的动植物，咨询！

    中文名：人热休克蛋白糖蛋白96（HSP gp96）ELISA试剂盒

    别名：人热休克蛋白糖蛋白96（HSP gp96）ELISA Kit

    供货商：上海远慕

    规格：48t/96t

    检测范围：人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊

    特异性：本ELISA检测试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。

    检测种属：人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。

    适用范围：此试剂盒仅用于科研实验，禁用于临床 。

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    ELISA的液体类标本：

    包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

    1）血清：

    室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    2）血浆：

    应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    3）尿液：

    用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

    4）细胞培养上清：

    检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

    检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    5）组织标本：

    切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。

    技术原理：

    1.抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

    2.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

    3.酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

    4.受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

    5.此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

    6.加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

    操作步骤：

    1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

    2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

    3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

    4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

    5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

    6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

    7、温育：重复4的操作。

    8、洗板：重复5的操作。

    9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。

    10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

    11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

    12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

    人热休克蛋白糖蛋白96（HSP gp96）ELISA试剂盒操作注意事项：

    1.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

    2.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

    3.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

    4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

    5.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

    6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

    7.加入试剂的顺序应*，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

    8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

    9.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

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