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    中文名：人血管活性肠肽（VIP）ELISA试剂盒

    别名：人血管活性肠肽（VIP）ELISA Kit

    供货商：上海远慕

    产品规格：96T/48T

    检测限：1.0 nmol/L

    标记物：HRP

    检测方法：双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体、ABS-ELISA法。

    预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。

    ELISA试剂盒包含以下各组分：

    （1）结合物及标本的稀释液；

    （2）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；

    （3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

    （4）酶的底物；

    （5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），ELISA试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）；

    （6）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

    标本的采集与保存：

    1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融

    2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

    3.组织匀浆：用预冷的 PBS （0.01mol/L, pH=7.2-7.4）冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织不对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记彔。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玱璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于 5000×g 离心 5~10 分钟，取上清检测。

    4.细胞培养上清或其他生物标本：

    请 1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

    自备物品

    1、 酶标仪（建议仪器使用前提前预热）

    2、 微量加液器及吸头，EP管

    3、 蒸馏水或去离子水，滤纸

    操作步骤：

    实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37℃溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

    1、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50?l，待测样品孔中先加样品稀释液40?l，然后再加待测样品10?l（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

    2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

    3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

    4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

    5、加酶：每孔加入酶标试剂50?l，空白孔除外。

    6、显色：每孔先加入显色剂A50?l，再加入显色剂B50?l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟。

    7、终止：每孔加终止液50ml，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

    8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    结果判断与分析

    1、 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

    2、 以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的LTB4标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的LTB4含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

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