上海远慕生物科技有限公司

影响质粒DNA细胞转染效率的原因
点击次数:143 更新时间:2024-07-02

  影响质粒DNA细胞转染效率因素
  
  1、质粒大小和转染量:在一般情况下,随插入片段长度的增加转染效率降低;而转染效率在一定的范围内与质粒转染量呈正相关。
  
  2、DNA质量:高质量的DNA对于转染的效率至关重要。如果质粒不纯会显著影响转染复合物的形成,进而影响转染效率。因此,可以选择提取纯度较高的试剂盒对DNA进行提取和纯化,以得到更高质量的DNA,从而提高转染效率。
  
  3、转染试剂的选择:转染试剂将外源核酸片段导入细胞,影响内源基因表达水平。在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂,例如在绵羊成纤维细胞转染过程中FuGene HD的转染效率更高,GenEscortTM I对小鼠胶质细胞则具有更好的转染效果。总之,可以遵循高效、低毒等原则进行选择。
  
  4、质粒与转染试剂比例:在一定范围内,转染效率与质粒/转染试剂比值成正相关,但毒性也会增加。可以根据转染试剂推荐比例确定合适的合适的转染比例。
  
  5、细胞状态:维持细胞生长及健康旺盛是提高转染效率的重要条件。建议选择对数生长期的细胞为佳,此时期的细胞生长旺盛,可能得到更高的转染效率,切勿选择传代次数过多,基因型可能发生改变的细胞。
  
  6、细胞密度:细胞密度过高或过低都会影响转染效果,过高则难以转染,过低则容易导致细胞死亡,因此需要选择合适的细胞融合密度进行转染,一般来说细胞密度在60%-80%时转染较为理想,但具体密度可参考转染试剂的说明书进行操作。
  
  7、血清:血清中含有大量的蛋白质,可能会降低转染效率。一般的转染试剂会要求转染时使用无血清培养基进行转染,转染完成后更换wan全培养基。但现在有些新的转染试剂血清的存在已不造成威胁,甚至还有助于提高转染效率,如阳离子聚合物等。
  
  8、抗生素:抗生素,如青mei素和链mei素,一般是作为培养基中的添加物来防止细胞污染。这些抗生素对于真核细胞没有毒性,但是转染时有些转染试剂增加了细胞的通透性使抗生素进入细胞,可能会间接导致细胞死亡,从而降低转染效率。可以根据转染试剂的要求来选择是否在培养基中添加抗生素。
  
  质粒DNA细胞转染注意事项
  
  线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。
  
  如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分,使得DNA形成转染复合物时更致密一些,更容易转染一些。纯化质粒的质量也会影响转染效率,一定要选择高质量的质粒。

上海远慕生物科技有限公司 版权所有 地址:上海市嘉定区曹安公路5588号 邮编:201202 电话: 管理登陆
传真:021-58999639 手机:13310162040 联系人:俞燕熙 邮箱:m13310162040@163.com  GoogleSitemap 网址:www.yuanmu-sh.com ICP备案号:沪ICP备14029423号-1
主营:ELISA试剂盒/染色液/溶液 /动物血清/标准品/化学试剂
点击这里给我发消息
手机:13310162040