上海远慕生物科技有限公司

Trizol法提取RNA原理以及详细步骤
点击次数:162 更新时间:2024-06-27

Trizol试剂的主要成分是苯ben酚。苯ben酚的主要作用是对细胞进行裂解,从而使细胞当中的蛋白质以及核酸物质解聚而得以释放。ben酚虽然可以有效的使蛋白质变性,但它不能wan全抑制RNA酶的活性,因此Trizol中还加入了8-羟基喹/啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(即RNA酶)。

Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。在样品的裂解液或匀浆中,Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后离心,样品能分成水样层和有机层。而RNA存在于水样层中。在收集上面的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀的方法来还原。在除去水样层之后,样品中的核酸和蛋白也能相继以沉淀的形式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能析出有机层的蛋白。

Trizol试剂不但可用于小量样品(组织:50-100mg;细胞:5×106),也可用于大量样品(组织≥1g或细胞≥107),对动物、植物、细菌、血液提取都适用,可同时处理大量不同样品。反应迅速,提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染,可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保护分析等。


Trizol法提取RNA原理以及详细步骤


TRIZOL提取RNA步骤

1、在提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。

2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟;在EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下(15℃~30℃)放置2~3分钟后,12000g(2℃~8℃)离心15分钟。

3、取上层水相置于新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15℃~30℃)放置10分钟,12000g(2℃~8℃)离心10分钟。

4、按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g(2℃~8℃)离心5分钟,弃上清;让沉淀的RNA在室温下自然干燥;用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。

Ps:在收集到生物材料之后,最好马上进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。

上海远慕生物科技有限公司 版权所有 地址:上海市嘉定区曹安公路5588号 邮编:201202 电话: 管理登陆
传真:021-58999639 手机:13310162040 联系人:俞燕熙 邮箱:m13310162040@163.com  GoogleSitemap 网址:www.yuanmu-sh.com ICP备案号:沪ICP备14029423号-1
主营:ELISA试剂盒/染色液/溶液 /动物血清/标准品/化学试剂
点击这里给我发消息
手机:13310162040