质粒提不出和得率较低的原因分析
点击次数：276 更新时间：2023-11-16
质粒提不出和得率较低的原因
1 ) 大肠杆菌老化：
请涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。
2 ) 质粒拷贝数低：
由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA 提取量低，可更换具有相同功能的高拷贝数载体 。
3 ) 菌体中无质粒：
有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此，不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落，另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。
4 ) 碱裂解不充分：
使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分。
5 ) 吸附柱过载：
不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。
6 ) 质粒未全部溶解(尤其质粒较大时)：
洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。
7 ) 乙醇残留：
漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，树脂型试剂盒漂洗后应晾干树脂，再加入洗脱缓冲液。
8 ) 洗脱液加入位置不正确：
洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会wan全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱效率。
9 ) 洗脱液不合适：
DNA只在低盐溶液中才能被洗脱，如，洗脱缓冲液EB(10mM Tris•Cl，pH8.5)或水。洗脱效率取决于pH值。最大洗脱效率在pH7.0～8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内，如果pH过低可能导致洗脱量低。洗脱时将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液加热至60℃后使用有利于提高洗脱效率。
