PCR 扩增产物出现多条带（杂带）解决方法
点击次数：2574 更新时间：2022-09-16
扩增产物出现多条带(杂带)
1) 引物用量偏大，引物的特异性不高。
应调换引物或降低引物的使用量。
2) 循环的次数过多。
适当增加模板的量，减少循环次数。
3) 酶的用量偏高或酶的质量不好。
应降低酶量或调换另一来源的酶。
4) 退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。
应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
5) 样品处理不当。
6) Mg2+浓度偏高。
因适当调整Mg2+使用浓度。
7) 若为PCR试剂盒。
也可能时试剂盒本身质量有问题。
8) 复制提前终止。
使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。
9) 反应缓冲液未*融化或未充分混匀。
确保反应缓冲液融化*并*混匀。
10) 引物特异性差。
利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
11) 引物量过多。
减少反应体系中引物的用量。
12) 模板量过多。
质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
13) 外源DNA污染。
确保操作的洁净。
