BCA法测定蛋白质浓度原理
点击次数：553 更新时间：2022-03-18
BCA法测定蛋白质浓度原理：
BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，蛋白质将 Cu2+ 还原为 Cu+，工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562 nm 下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
BCA 蛋白浓度测定试剂盒，远慕的蛋白质定量试剂盒(BCA法)提供一个简单，快捷，兼容去污剂的方法，准确定量总蛋白。
成分：
试剂 A，100 mL
试剂 B，2 mL
标准蛋白(BSA)1 mL×2，1 mg/mL
保存条件运输温度:室温(标准蛋白 4~8 ℃ 运输)
保存温度:室温(标准蛋白 -20 ℃ 保存)
有效日期:12 个月
使用方法：
方法一:96 孔板
1.配制 BCA 工作液:根据标准品和样品数量，按 50 体积试剂 A，1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工作液。充分混匀。
2.将蛋白标准品按 0 μL，1 μL，2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL 加入 96 孔板的蛋白标准品孔中。加灭菌双蒸水补足到 10 μL。取 10 μL 待测样品加入 96 孔板的待测样品孔中。每个测定要做 2~3 个平行。
3.向待测样品孔和蛋白标准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即样品与工作液的体积比为 1:20)，混匀。
4.37 ℃ 温浴 30 min。冷却至室温。
5.酶标仪 562 nm 波长下测定吸光度。
6.制作标准曲线。从标准曲线中求出样品浓度。
