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种类繁多的培养基该如何去选择?
点击次数:44 发布时间:2020-10-21

 细胞培养是大多数生物实验室都会遇到的基础实验,但不是最-简单的实验。细胞培养蕴含着大学问。细胞培养状态不好相信每个细胞培养者都遇到过。有时候细胞状态不好,转染 、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多,但首要因素是选好合适的细胞培养基。很多研究者只对一两种培养基比较了解,下面让我们详细介绍一下各种培养基的不同之处。

培养基

基础培养基绝大多数是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最-广泛应用的基础培养基是MEM ,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。

目前科研市场经典的培养基有很多种,其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最-广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。

◆ MEM是由基础培养基(BME)发展而来的,其中增加了组分的范围及浓度。

◆ 改良的基础培养基培养基也就是我们所说的DMEM培养基最初是为小鼠成纤维细胞培养专门设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。

◆ a-MEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。

◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM 等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的,现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。

很多新人经常困惑细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单,也可以好复杂。如果这种细胞是购自细胞库,那您直接问供应商就行了,他们会给您一个最-适合的推荐。如您不知道细胞的来源,您也可以找到相关的文献,基本文献中使用的培养基都可作为参考。但如果你是着手建立一种全新细胞的培养体系,根本找不到任何参考,那你就得花点时间自己试验。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首-选MEM做贴壁细胞培养、RPMI 1640做悬浮细胞培养会是一个好的开始。最-好同时选购几种不同的培养基同时进行培养实验来选择其中最-适合的。有时候你会惊讶地发现你的最-佳培养条件与文献报道的不同,就算是同一种培养条件,细胞的生长状态也时好时坏,这是很正常的。因为试剂、水、不同批号的血清之间都存在着差异。要提高培养基的稳定性,可以从培养基和血清两方面入手。

以前大部分实验室都是用干粉培养基,但干粉有很多弊端

1. 配制过程就较为繁琐,要溶解、调pH值,过滤,过程中可能会产生一些浓度误差,

2.有些实验室的水质并不理想,所以培养的效果会有差异。

如果使用液体培养基,这种人为的误差会减少,因为毕竟是大批量工业化生产的,批间差会很小。

血清

说到细胞培养,血清固然是细胞培养中不可或缺的成分,但血清的批间差异大,更换血清时需要做大量的测试以取保替换的血清与原来的相似。而血清的供应也是必须要考虑的因素。由于气候或疯牛病等的影响,血清货源的问题对实验的影响可非同小可。另外,血清的价格也很昂贵,高品质的澳洲血清价格更高。因此,也有一些实验室开始换用无血清培养基。

无血清培养基(Serum-Free Media),

通常以SFM表示,顾名思义,就是在细胞培养中不需要添加血清,但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。无血清培养基中添加了血清的主要成分:粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等,能减少上述血清带来的不利因素,使细胞培养的条件更稳定。但它也不是完美的,从有血清培养过渡到无血清培养的条件并不像想象中那么直截了当。处于发育的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比)需要不同的配方,对生长因子和细胞因子的选择尤为重要。而且在去除血清的同时,也去除了一些血清蛋白具有的保护、解毒作用,因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。另外,它的价格也比普通的培养基贵很多。

细胞培养基应用选择

选择培养基没有固定的标准,有几点建议可供您参考:

(1) 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首-选的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。

(2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。

(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640。

(4) 用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最-佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。
 

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