Masson三色染色是结缔组织染色中经典的一种方法,又称马松染色,是显示组织中纤维的主要方法之一,是胶原纤维染色而经典的技术方法。
Masson染色
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关,分子的大小由分子量来体现,小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织;而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而,淡绿或苯胺蓝的分子量都很大,因此Masson染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈绿色或蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
病理诊断意义
(1)器官硬化性疾病的观察:如肝硬变、心肌瘢痕的观察,胶原染色更易于观察诊断。
(2)瘢痕与淀粉样物质鉴别:前者胶原纤维染色为阳性,后者为阴性。
(3)骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别:利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱,纵横交错,后者较规则。
样本要求:组织片充分固定和脱蜡。
实验步骤
1.石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
2.苏木素染细胞核:masson染色试剂盒内Weigert氏铁苏木素染5min,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,流水冲洗数分钟返蓝。
3.丽春红染色:masson染色试剂盒内丽春红酸性品红液染5-10 min,蒸馏水快速漂洗。
4.磷钼酸处理:masson染色试剂盒内磷钼酸水溶液处理约3-5 min。
5.苯胺蓝染色:不用水洗,直接用masson染色试剂盒内苯胺蓝液复染5min。
6.分化:1%冰醋酸处理1min。
7.脱水封片:将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
8.显微镜镜检,图像采集分析。