原理:麦胚凝集素(WGA)是从谷物中提取出来,可以特异性的结合心肌细胞膜上的一种糖蛋白,二者结合起来可以将心肌细胞膜染出来。WGA 可以把心肌细胞膜染出来,这样是否肥大的细胞从图像与正常组的对比就可以看出,也可以用专门的软件对染出的细胞进行直径、面积等的测量,能够分析心肌细胞是否肥大。
试剂盒组成:
iFluor 488-WGA 染色液(即用型)
抗荧光淬灭封片剂(干固型)
DAPI(即用型)
使用方法:
1、样本准备:
1)石蜡切片:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ。取出放在通风厨内,酒精晾干后放入自来水中稍洗,蒸馏水洗。
2)冰冻切片:取出低温冷冻的冰冻切片复温后,切片浸没于固定液中固定 10-30min,PBS 洗5min 重复 3 次。
3)细胞爬片(固定):培养好的去掉培养液,PBS 清洗 3 次,在细胞爬片上滴加固定液固定 10- 30min,PBS 洗 5min 重复 3 次。
2、抗原修复:组织切片置于盛满 PH 9.0 EDTA 碱性抗原修复液或者 PH6.0 柠檬酸修复缓冲液的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。自然冷却后将玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 5min。(新鲜组织冰冻切片和细胞爬片省略此步骤)。
3、WGA 染色:组化防水笔画圈,然后滴加 iFluor 488-WGA 染色液于 37 度染色避光孵育 30min-2h(湿盒内放少量水),PBS 洗 5min 重复 3 次。
4、DAPI 复染细胞核:滴加 DAPI 即用型染液,避光室温孵育 5min-20min,PBS 洗 5min 重复 3 次。
5、封片:玻片滴加适量抗荧光淬灭封片剂,轻轻的从一侧盖下盖玻片(建议使用本试剂盒内抗荧光淬灭封片剂 ,封片过程应避免气泡)。
6、镜检拍照:切片于荧光显微镜/共聚焦/多通道荧光扫描仪/多光谱成像系统下观察并采集图像。
结果:Dapi 复染细胞核呈蓝色;iFluor 488-WGA 标记阳性呈绿色
注意事项:
1、WGA 染料存在淬灭的可能,建议试用本试剂盒内的抗荧光淬灭封片剂,并尽快成像。
2、对于活细胞染色,可不用固定,用 PBS 清洗掉培养液后,加入 WGA 染料 37 度避光 10-30min。
3、固定后的样本(如石蜡切片),须经过高温修复否则会造成染色阳性结果偏弱。
4、对于细胞样本,染色前避免使用通透液,否则会造成细胞内(如高尔基体和内质网)结构的染色。
5、WGA 染料建议分装后-20 度保存,尽量避免反复冻融。





