抽提RNA实验色素污染去除方法
点击次数：170 更新时间：2024-03-01
用Trizol法沉淀RNA容易有一些杂质的。部分色素是会和RNA一起沉下来。这种情况可以用75%冷的乙醇多洗几遍。对后续qRT-PCR多数情况下没什么影响。
另外可以用硅胶柱法纯化RNA，色素残留会少一些。
RNase污染的来源
1：手指头 – 手指头是外源酶的第一来源，所以必需戴手套并且频繁更换。另外，口罩也必需戴，因为呼吸也是一个重要的酶来源。戴手套口罩的另外的好处是保护实验人员。
2：枪头，离心管，移液器 单纯的灭菌是不能灭活RNase的，所以枪头和离心管要用DEPC处理，即使是标明为DEPC处理过的。移液器最好是专用的，用前用75%的酒精棉球搽拭干净，尤其是杆子；另外，一定不要使用褪头器。
3：水/缓冲液 一定要确保无RNase污染。
4：实验台面最起码要用 75% 的酒精棉球搽拭干净。
5：内源 Rnase 所有组织均含内源酶，故组织用液氮速冻是降低降解的最好办法。液氮保存/碾磨方法的确不方便，但对有一些内源酶含量很高的组织，却是唯1的办法。
6：RNA 样品 RNA抽提产物可能都会含痕量的RNase污染。
7：质粒抽提 质粒抽提往往用到RNase降解RNA，残留的RNase要用 Proteinase K 消化，PCI 抽提。
8：RNA 保存 即使低温保存，痕量的RNase亦会导致RNA降解。长期保存RNA的最好办法是盐/醇悬液，因为醇在低温时抑制所有的酶活性。
9：阳离子 (Ca, Mg) 在含这些离子时，80℃加热5分钟会导致RNA被剪切，故如果RNA需要被加热，保存液需要含螯合剂(1mM Sodium Citrate, pH 6.4)。
10：后续实验所用的酶 酶均有可能被Rnase污染。
