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Western Blot实验试剂的准备工作
点击次数:633 更新时间:2022-07-20

 

 

  1. 30%储备胶溶液: 丙烯酰胺(Acr) 29.0g

  亚甲双丙烯酰胺(Bis) 1.0g

  混匀后ddH2O,37℃溶解,定容至100ml,棕色瓶存于室温。

  2. 4×分离胶缓冲液(1mol/L Tris-HCl PH 8.8) Tris 18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调PH 8.8,定容至100ml。

  3. 4×浓缩胶缓冲液(0.5mol/L Tris-HCl PH 6. 8) Tris 12.1g加ddH2O溶解,浓盐酸调PH 6. 8,定容至100ml。

  4. 10%SDS:电泳级SDS 10.0g加ddH2O,68℃助溶,浓盐酸调PH 7.2,定容至100ml。

  5. 5×电泳缓冲液(PH 8.3): Tris 15.2g

  甘氨/酸 94g

  ddH2O 定容到1000ml

  SDS 5g

  先在974ml蒸馏水中加入Tris碱,待溶解*后,再加甘氨/酸,最后加SDS。

  6. 10%过硫酸铵(AP):0.1g AP加ddH2O至1.0ml,4℃保存,要在一周内使用,最好新鲜配制。

  7. 2×加样缓冲液:2×SDS加样缓冲液

  0.5mol/L Tris-HCl (PH 6.8) 2ml

  10%SDS 4 ml

  β-巯基乙醇 1ml

  甘油 2ml

  1%溴芬蓝 1ml

  置4℃避光保存

  8. TEMED:注意室温较低时TEMED量可加倍,最后灌胶之前再用

  9. 转膜缓冲液(Towbin transfer Buffer): 即1×SDS-PAGE

  10. 0.0 1mol/L PBS (PH 7.4) : NaCl 8.5g

  (12H2O)Na2HPO4 2.9011g

  (2H2O)NH2PO4 0.24g

  加ddH2O定容至 1000ml

  11. 封闭液: 1×PBS中加入 30ml

  5%(V/V)脱脂奶粉 1.5g

  0.02%叠氮钠 0.006g

  0.05%Tween-20 0.015g

  12. 漂洗液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS溶液

  每1000 ml PBS溶液中加0.5 ml Tween-20

  13. 水饱和正丁醇: 正丁醇 50 ml

  ddH2O 5 ml 加入瓶中震荡,使结合,存于室温。

  用时取上面一相加在凝胶上面。

  14. 考马斯亮蓝染色法试剂:一般用G250考马斯亮蓝(蛋白定量专用)

  染色液: 90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液中溶解G250马斯亮蓝0.25g,用Whatman 1号滤纸过滤染液以去除颗粒状物质。(染色液多次回收利用)

  脱色液:90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液

  15. 丽春红S染色色法试剂:2%乙酸,

  0.5%丽春红的水溶液

  脱色液:TBS

  16. Aprotinin:为一58氨基碱性多肽,经反复冻融后,会发生集聚,储存液应分装成小份,保存于-20度,每一小份用后应予废弃。

  17. PMSF:在溶液中不稳定,应在临用前从储存液中现加于裂解液中。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量的水冲洗。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF通常配成10mmol/L浓度储液(1.74或17.4mg/ml溶于异丙醇中)保存于-20度。

  18. 显色液:联苯胺显色液(DAB)

  DAB 2ml

  10%H2O2 60μl

  PBS(0.1mol/L PH6.4) 10ml

  19. 三去污裂解缓冲液

  0.5mol/L Tris-HCl(PH 8.0) 0.785g/100ml

  0.15mol/L NaCl 0.8775 g/100ml

  0.02%叠氮钠 0.02 g/100ml

  0.1%SDS 0.1 g/100ml

 

 

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