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关于蛋白酶K远慕生物为实验人介绍!
点击次数:63 发布时间:2022-06-30

 蛋白酶K是一种从白色念 珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶,具有很高 的比活性,是DNA提取的关键试剂。该酶在较广的pH范围(4?12.5)内及高温 (50?70°C)均有活性,用于质粒或基因组 DNA、RNA的分离。在DNA提取中,主要作用是酶解与核酸结合的组蛋白,使 DNA游离在溶液中,随后用不同方法进行抽提,除去杂质,收集DNA。EDTA等螯 合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。蛋白酶K贮存液一般为10mg/ml或20mg/ml。 贮存于一20°C。蛋白酶K溶液为无色透明, 如出现沉淀就不能再使用。

蛋白酶K,是一种切割活性较广的丝/氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。

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一、作用:

蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核 的消失,从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。

蛋白酶K的应用比较广泛,它可以消化包围靶DNA蛋白,因此使用蛋白酶K能够增加探针 与靶核酸结合的机会增强杂交信号,但在使用蛋白酶K时要主要使用的浓度,过高或者过低都会破坏细胞的结构、核消失等影响试验结果。

二、保存方法:

保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。

孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。

三、蛋白酶K配制标准:

20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

四、蛋白酶K跟蛋白酶有什么区别:

蛋白酶是所有能够催化分解蛋白质的酶类的统称,而蛋白酶K则是特指一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的降解,比如在提取DNA时溶解DNA的水中就有一定量的蛋白酶K.所以它们不属于同一个产品。

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