蛋白纯化实验中生物缓冲液的选择
点击次数：745 更新时间：2021-11-22
蛋白质的结构和功能需要在合适的pH值环境中才能维持，因此在蛋白的制备及纯化过程中，生物缓冲液的选择非常重要，只有合适的缓冲液才能保证蛋白的活性和结构稳定。
蛋白纯化过程缓冲液作用
用于蛋白纯化的缓冲剂有很多种，在维持体系的pH同时，要保证蛋白在纯化过程中不能失活，或者是尽量减少蛋白失活的量，在蛋白纯化的每一个步骤中都要保持蛋白的可溶性和活性。
蛋白纯化缓冲液要求
蛋白纯化过程中的缓冲液既要防止蛋白降解，也要防止蛋白聚合，其对实验结果影响显着。在选择和试剂缓冲液时应考虑以下几个因素：pH值、缓冲体系、盐离子、还原剂和稳定剂。其中每一个因素都要根据所纯化的目标蛋白进行优化，并以目标蛋白的活性作为优化的评估标准。
了解蛋白稳定性条件
蛋白的种类很多，不同的蛋白适应的pH值有差异，需根据其最适pH值来选择缓冲液。很多时候采用的是pH是7.4，这是模仿的生物条件，大多数蛋白在这个pH值下是稳定的。不过也有一些是例外的，这就需要调整pH值，以保持蛋白是可溶的且不会降解。
蛋白纯化常用的缓冲剂
蛋白纯化过程中常用的缓冲液有Tris、Tricine、Bis-Tris、MOPS等，其中普遍的是用Tris，它的缓冲范围接近生理pH值，且有着较低的离子强度，是蛋白质的良好溶剂，能保证蛋白的稳定性。需注意的是配制缓冲液时，尽量避开目标蛋白的等电点pl。因为蛋白在其等电点的pH溶液中表面没有静电荷，带百分子间排斥力减小，容易聚集，溶解度降低。
现在需纯化的蛋白的适应pH值、等电点、以及缓冲液的缓冲范围都是可以查到的，直接按对应要求匹配即可
