远慕课堂：细胞传代方法您做对了吗？
点击次数：643 更新时间：2019-08-16
通过自主研发和兼并重组不断扩展企业产品线，逐步发展为试剂的专业制造商和电子商务集成供应商，成为试剂行业发展的者。开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全。
细胞与试剂方面：
1、细胞(单层细胞，镜检适合)
2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)
3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1 万单位）
4、7.5％NaHC03 溶液
5、0.25％胰蛋白酶
6、 PBS 洗液。
实验小用具方面：
1、小方瓶(100m1)
2、克氏瓶
3、胶塞
4、吸管(10ml、1m1）
5、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)
6、C02 孵箱
7、超净台
8、倒置显微镜
9、4℃、- 20℃冰箱
细胞传代的操作步骤
1、挑选细胞：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。
2、配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内，加入灭活小牛血清10m1，庆大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氢钠溶液3ml。（仅供一般参考）。
3、消化细胞：先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液*覆盖细胞表面。
4、至细胞*脱落到胰酶中：每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。
5、加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4 天成片(由细胞接种浓度决定)。
6、填写传代记录。
