注意细节问题 才能决定ELISA试剂盒实验的成败
点击次数：590 更新时间：2019-05-22
咱们在运用ELISA试剂盒96孔板的试验测定的时分，常发现有“边缘效应"，也就是外周孔显色较基地孔深。经研究证真实温育中的热力学梯度也许是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在试验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃摆布）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与基地孔之间也许存在一热力学梯度。因而运用水浴或在将反响溶液参加至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地扫除“边缘效应"，而且可进步测定的重复性。
ELISA试剂盒还有就是在试验中，必定有运用微量加样器参加样本的步骤。提示留意：加样不行太快，要防止加在孔壁上部，不行溅出和发生气泡。ELISA试剂盒太快的话无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易致使非特异吸附。溅出会对附近孔发生污染。出现气泡则反响液界面有区别。所以，有时分一份标本用一样的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，通常就是上述加样及试剂的过错所造成的。
ELISA试剂盒实验操作中，须特别注意一些细节问题，细节直接影响着试验的成功与否，以下是ELISA试剂盒实验八大忌讳，以供各位试验君参考：
一、如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先将样本稀释必定倍数（n倍）后再测定，核算时请zui终乘以稀释倍数（×5×n）。
二、ELISA试剂盒从冷躲环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装进密封袋中保留。
三、严厉依照说明书的操纵进行，ELISA试剂盒实验成果断定有必要以酶标仪读数为准。
四、浓洗刷液可能会有结晶析出，ELISA试剂盒稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。
五、本试剂不一样批号组分不得混用。显色剂B请避光保留。
六、ELISA试剂盒一切样品，洗刷液和各种废弃物都应按感染物处理。
七、各步加样均应运用加样器，并常常校正其正确性，以避免实验误差。一次加样时刻*控制在5分钟内，如标本数目多，引荐运用排枪加样。
八、封板膜只限一次性运用，以避免穿插污染。
