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人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒操作步骤
点击次数:1056 更新时间:2018-06-28

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  【信息说明

  中文名称:人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒

  中文别名:人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA kit

  供应商:上海远慕

  规格:48t/96t

  保存:2~8℃

  有效期:6个月

  样本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

  用途:科研实验等领域科学研究,不得用于临床诊断。

  特点:灵敏性高、特异性强、重复性好.种属:人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

  运输方式:现货供应,一般为快递运输,江浙沪隔天到,外地及偏远地方三至五天时间到货。

  检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本;例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

 

  【使用原理

  1、ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

  2、结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。

  3、在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

  4、用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。

  5、此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

  6、由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。

 

  【特点说明

  1、专一性强。抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。

  2、灵敏度高。由于抗体联结上了酶,因此,借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大提高了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。

  3、样品易保存。经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定,因此有利于样品的保存。

  4、结果易观察。对检测结果即可用肉眼观察,又可用显微镜观察,也可以用分光光度计进行比色测定,还可用显微镜观察。这是因为某些酶反应产物能使电子密度发生改变,从而引起被检测物的显示。

  5、可以定量测定。溶液中的抗原物质,应用酶免吸附技术进行比色测定,依据光密度值的变化,可以定量。预计用细胞分光光度计可对组织内的抗原进行免疫酶技术的定量测定。

  6、可以大规模测定样品。如有成千上万份样品需要进行检测,免疫酶技术都能在较短时间内完成。

 

  【组织结构

  1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

  2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

  3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

  4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。

  5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

  【操作步骤

  1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  3、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

  4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  5、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  6、温育:操作同3。

  7、洗涤:操作同5。

  8、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  9、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  10、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

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