上海远慕【进口 国产】标准品对照品厂家详细讲述硬组织线粒体分离试剂盒的信息简介及其他咨讯，本司所供应的试剂盒品种齐全，价格实惠，本品属细胞组分离类，有效期一般为12个月，同期分离试剂盒还包含有细胞线粒体分离试剂盒，组织线粒体分离试剂盒，更多试剂盒品种请来电!
【信息说明】
产品名称：硬组织线粒体分离试剂盒
供应商：远慕标准品对照品厂家
规格：50T
分类：细胞组分分离
储存条件：-20℃,12个月
用途：适用于快速从动物硬组织(心肌、骨骼肌)或其他难以分离线粒体的组织中提取线粒体。
注意事项：采用梯度离心法分离线粒体外膜和内膜以及基质膜,大部分获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜
【简介说明】
线粒体是细胞呼吸的主要场所，细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应。
硬组织线粒体分离试剂盒(Hard Tissue Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分离动物硬组织(如骨骼肌)中的线粒体，分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白，适用于从动物硬组织(心肌、骨骼肌)或其他难以分离线粒体的组织中提取线粒体。
【操作步骤】
1、清洗：迅速称重，用预冷的清洗，弃Wash buffer，冰上剪成大小的组织碎片。
2、裂解：加入Mitochondria Lysis buffer，置于冰浴。
3、匀浆Ⅰ：转移至预冷的Dounce匀浆器中，匀浆，或采用电动匀浆器，700rpm，8～10次。不同组织或不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。
4、匀浆Ⅱ：4℃搅拌孵育。用等体积的Mitochondria Stock buffer稀释至匀浆液，再次重复步骤3。
5、离心：用尼龙网或细胞筛过滤匀浆液，4℃，离心，以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。
6、上清液转移至一干净离心管，4℃离心。注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为6000g离心10min，其缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
7、弃上清，沉淀为线粒体，如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀。
8、保存：弃上清，用适当缓冲液悬浮沉淀。如果用于线粒体酶活性或功能的分析，线粒体沉淀应重悬于Mitochondria Stock buffer;如果用于线粒体蛋白的分析，获得的细胞浆蛋白应保存于1×Protein Stock buffer，即按细胞浆蛋白：Protein Stock buffer (5×)=1:4比例混合;如果用于双向电泳，应使用恰当的保存液。
【注意事项】
1、试剂 (如PMSF)对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后可以不必使用。
2、分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷，全部操作时间尽量控制在1h以内。
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