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Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步骤
点击次数:1909 更新时间:2018-01-23

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中文名:Hoechst33258染色液(1mg/ml)

供应商:上海远慕

规格:1ml

分类:细胞染色

保存:—20℃,避光,12个月

用途:细胞凋亡检测,普通细胞核染色,常规的DNA染色。

说明:Hoechst33258染色中leagene公司推荐采用该试剂;Hoechst33258是一种荧光染料,可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低;染色染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测,可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色,也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步骤

Hoechst33258染色液(1mg/ml)

 

Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步骤

1、固定的组织细胞染色

a.对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂;随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33258染色;如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的Hoechst33258染色。

b.对于贴壁细胞或组织切片,加入少量Hoechst 33258工作液,覆盖住样品即可;对于悬浮细胞,至少加入待染色样品3倍体积的工作液,混匀;室温放置3-5分钟。

c.吸除Hoechst33258染色液,用TBST,PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。

d直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察;细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。

2、活细胞染色

a.根据实验具体要求,用无菌去离子水稀释到自己所需浓度,即为Hoechst33258染色工作液;细胞核染色时,一般推荐工作浓度为1~5μg/ml。

b.取96,24,6孔板培养细胞至合适状态;按96孔板加入100μl,24孔板加入500μl,6孔板加入1ml的比例,加入适当的Hoechst33258染色液,染液必须充分覆盖细胞。

c.在适宜于细胞培养的条件下培养。

d,轻轻吸除Hoechst33258染色液。

e.用无菌的PBS或生理盐水清洗2~3次。

f.进行荧光检测。

 

Hoechst33258染色液(1mg/ml)注意事项:

1、Leagene Hoechst33258染色液(1mg/ml)应稀释至合适的浓度后使用。

2、荧光染料都存在淬灭的问题,为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂;建议染色后尽量当天完成检测,活细胞或组织染色后应立即观察。

3、避免反复冻融,否则容易失效。

4、Hoechst33258对人体有一定刺激性,请注意适当防护。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

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