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中文名:腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)
供应商:上海远慕
规格:100T
分类:酶类检测
保存:4℃,避光,6个月
用途:定量检测血清、血浆、组织等样品中的腺苷脱氨酶活性
说明:腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷水解脱氢,产生铵离子;通过分光光度计检测640nm处吸光度。
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)检测原理:
待测样品中的ADA催化腺嘌呤核苷水解脱氨,产生次huang嘌呤核苷和铵离子,利用波氏显色法,测定氨离子生成量;其反应公式为:腺苷+H2O→次huang嘌呤+NH3;通过分光光度计检测处吸光度,根据计算公式可得ADA活力,100T试剂盒可测50个样本;该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)操作步骤:
1、准备样品:
a、血浆,血清样品:血浆,血清按照常规方法制备;可以直接用于本试剂盒的测定,冻存,用于ADA的检测。
b、细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,冻存,用于ADA的检测。
c、高活性样品:如果样品中含有较高活性的ADA,可以使用ddH2O稀释。
d、(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ADA含量。
2、稀释标准品:用ddH2O准确稀释氨氮标准(1mg/ml)至25μg/ml,即为氨氮标准工作液,4℃保存,备用。
3、ADA检测:设置空白管,标准管,对照管,测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
4、混匀,分光光度计处检测吸光度值,比色杯光径,以ddH2O调零,读取各管吸光度值;一般应数小时内检测完毕;酶活力高于上限者,应将样品稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)注意事项:
1、稀释样品和研磨样品所用水,均应为ddH2O,不可为普通的水。
2、如果采用单位,需在测得活力单位基础上乘以1.19。
3、胸水标本经离心后取上清,置于4℃保存备用,ADA活性可稳定1周。
4、血清样本应避免溶血,4℃保存3天。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明:
腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase,ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类,属于一种巯基酶,每分子至少含2个活性巯基;ADA能催化腺嘌呤核苷转变为次huang嘌呤核苷,再经核苷磷酸化酶作用生成次huang嘌呤,其代谢缓和终产物为尿酸;ADA广泛分布于人体各组织中,以胸腺,脾和其他淋巴组织中含量zui高;而肝,肺,肾和骨胳肌等含量低。
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